|
|
Synthesa peptidů jako potenciálních ligandů aspartátové proteázy HIV a MAY1 a ověření jejich inhibiční aktivity
Klikarová, Ivana ; Šácha, Pavel (vedoucí práce) ; Žáková, Lenka (oponent)
Virus lidské imunodeficience (HIV) je lentivirus, součást čeledi Retroviridae, přenosný krví a jinými tělesnými tekutinami. Nepřetržitá replikace HIV v lidském těle vede k destrukci klíčových imunitních efektorových buňek, lymfocytů CD4. Postupem času vede pokles CD4 lymfocytů k oportunním infekcím, které definují syndrom získané imunodeficience (AIDS). Potřeba nových tříd antiretrovirových léků se stala aktuální kvůli rostoucím obavám z dlouhodobých toxických účinků stávajících léků, potřebě bojovat proti variantám HIV-1, které jsou rezistentní vůči léčbě, a četnosti změn léčby u pacientů, kteří již nějaké léky užívali. V současnosti je vývoj léků zaměřen na inhibitory dvou virových enzymů - reverzní transkriptázy a proteázy. Antiretrovirová terapie používá inhibitory proteázy v kombinaci s nukleosidovými analogy způsobující účinnou a trvalou supresi virové replikace, snížení morbidity a prodlužování života pacientů s infekcí HIV. Infekce způsobené Cryptococcus neoformans a Cryptococcus gattii postihují převážně imunokompromitovanou populaci a vyznačují se vysokou morbiditou a mortalitou. Tato populace zahrnuje jedince infikované HIV a osoby podstupující transplantaci orgánů, stejně jako zdánlivě imunokompetentní pacienty. V posledních letech vzniká na běžně používaná antimykotika rezistence,...
|
|
|
Příprava a charakterizace vesiculinu, dvouřetězcového proteinu odvozeného z IGF-2
Mrzílková, Karolína ; Žáková, Lenka (vedoucí práce) ; Pačesová, Andrea (oponent)
Hormony insulinové rodiny jsou jednou z nejstudovanějších skupin proteinů v souvislosti s velkým počtem civilizačních chorob, mezi které patří vedle diabetu mellitu (cukrovky) a nádorového bujení i některé neurodegenerativní choroby. Jedním z nejnovějších příspěvků do této skupiny je dvouřetězcový analog IGF-2, vesiculin. Tento peptid byl původně nalezen v sekrečních granulích myších β-buněk slinivky břišní. V současné době je studován jeho autokrinní, nebo parakrinní vliv na β-buňky slinivky břišní. Jeho sekvenční totožnost s IGF-2 a strukturní příbuznost s insulinem z něj činí vědecky atraktivní téma, kvůli předpokládaným metabolickým, proliferačním a růstovým účinkům. Téma vesiculinu je spjato i s problematikou insulinové resistence, což je patologický stav typicky přítomný v časných vývojových fázích diabetu mellitu 2. typu. Vesiculin je i za těchto podmínek schopen stimulovat syntézu glykogenu z krevní glukosy, čímž se výrazně liší od insulinu a IGF-2, jejichž aktivita je za těchto podmínek utlumena. Další studium interakce vesiculinu s receptory hormonů insulinové rodiny, mezi které patří nejen dimerní tyrosinkinasové receptory pro insulin a IGF-1, ale i monomerní receptor pro IGF-2, by mohlo poskytnout více informací nejen o podstatě této vazby, ale i o dalších biologických vlastnostech...
|
|
|
Vývoj instrumentace a metod s vysokou propustností pro hledání a validaci peptidových ligandů
Kryštůfek, Robin ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Jiráček, Jiří (oponent)
Peptidy tvoří synteticky dostupné a snadno derivatizovatelné "lešení", na jehož základě je možno vyvíjet ligandy zaměřené na široké spektrum biologických cílů. Tradiční postup k identifikaci těchto výchozích peptidů je příprava a testování kombinatoriálních knihoven. Kombinatoriální syntézu a následný screening je možné obejít využitím biologických systémů prezentace, identifikace a selekce peptidů založených na principu in vitro evoluce - tzv. display technik. V této práci je představen vývoj automatizovaných řešení obou těchto přístupů. Prvním z nich je paralelní syntetizátor peptidů SPENSER vyvinutý v rámci tohoto diplomového projektu jako nástroj k hledání a optimalizaci peptidových ligandů, stejně jako k validaci ligandů nalezených display technikami. K popisu jeho funkčních omezení bylo připraveno několik knihoven sestávajících celkem z 1 052 peptidů. Reprezentativní vzorek 154 preparací, představující 14,6 % analytické pokrytí připravených knihoven, vykazoval dle LC-MS průměrnou čistotu 67 ± 19 %. Na předložených knihovnách je ilustrováno, že SPENSER je vhodným nástrojem pro paralelní syntézu lineárních i disulfidově cyklizovaných peptidů s omezenou variabilitou, či knihoven sestávajících z krátkých peptidů. Jeho nízký rozsah reakce ve srovnání s komerčně dostupnými syntetizátory dále...
|
host ::
RSS.